验证抗体特异性的第一个策略建议

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摘要:

国际抗体验证工作组(IWGAV)在9月的在线杂志《自然方法》 (Nature Methods)中宣布了为解决抗体特异性、功能性和可重复性方面未满足的关键需求而制定的初步策略。IWGAV在其规模和范围上是第一个倡议,旨在为抗体制造商和用户建立战略建议。

赛默飞世尔科技的赛默飞世尔科技在2015年向IWGAV提供了资金支持,以率先制定行业标准,并帮助应对与抗体特异性和可重复性相关的常见挑战。虽然抗体是科学研究中最常用的工具之一,但没有全面的科学框架来验证跨研究应用的抗体特异性。据估计,由于实验失败或不可靠,仅在美国,每年使用特性不佳的抗体就要花费3.5亿美元,在全球范围内要花费8亿美元。

瑞典斯德哥尔摩皇家理工学院微生物学教授MathiasUhln博士说:“这一出版物是朝着制定广泛认可的验证抗体的标准和确保生物医学研究的高质量和一致的抗体迈出的重要的第一步。”IWGAV .“我们期待收到来自抗体使用者、出版商、资助机构和制造商的广泛反馈,以帮助加强这一初步提议,并确保这些生物医学研究基本工具的可靠性。”

IWGAV确定了五个“概念支柱”来指导具体研究应用中的抗体验证:遗传策略:使用CRISPR/Cas或RNAi等技术来测量目标基因被敲除的对照细胞或组织中的相关信号。正交策略:使用抗体无关的方法对大量样本进行量化,然后检查基于抗体的量化和抗体无关的量化之间的相关性。

独立抗体策略:使用两种或两种以上的独立抗体,可以识别目标蛋白上的不同表位,通过比较和定量分析确认特异性。标志蛋白的表达:修饰内源目的基因,添加亲和标签或荧光蛋白的序列。来自标记蛋白的信号可以与基于抗体的方法的检测相关。

免疫捕获,随后是质谱(MS):偶联免疫捕获,即通过与靶特异性抗体结合,从溶液中分离蛋白质的技术,和MS分析,鉴定与纯化抗体直接相互作用并可能与靶蛋白形成复合物的蛋白质。

虽然这些概念支柱中的每一个都可以提供抗体特异性的证据,但IWGAV建议使用多个支柱来声明特定抗体已被充分验证用于特定应用。《自然方法》 (Nature Methods)中的手稿还包括对生产者和使用者的建议,以确保抗体随时间的可重复性。

标签:抗体特异性
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